精子贮存方法和冷冻源

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精子贮存方法 人类精子要进行冷冻贮存，必须要进行精子的分装，精子分装方法有三种：即颗粒法、细管法和安瓿法。颗粒法操作方便，但极易污染且无法标记，目前，基本上已不再用于冻存人类精液，现主要采用后两种方法。

一、细管法 细管是一种似麦杆的毛细塑料管，有0.25ml和0.5ml两种容积规格。细管冷冻法有许多优点，如冷冻降温过程中降温均匀、降温速率快、易标记、易保存、空间占据少，使用时精液损耗少等优点，且因两端密封贮存，大大降低了交叉污染的可能性。精液冷冻时，将精液和冷冻保护剂混合均匀后，利用负压的作用，将精液和保护剂混合物吸入麦管中，两端用聚乙烯醇密封。进行人工授精时，待冷冻精液复苏后，可剪开麦管两端，用特制的枪将麦管内复苏的冷冻精液注射到女性生殖道。
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二、安瓿法 早期多采用药用安瓿，使用前高压灭菌，再将与保护剂混合好的精液注入安瓿内，体积约1ml，瓶口可用火焰熔封或塑料帽封口，否则液氮会进入安瓿中。复温时，由于液氮快速气化，体积骤然增大几百倍，极易引起爆炸，其安全性难以保证，目前，安瓿已被对精子无害的有盖塑料管取代，此种塑料管冷冻效果很好，不易爆炸，并有配套的小盒，存取十分方便，目前已被大多数精子库所采用。

冷冻源

早期精子冷冻及贮存均是利用干冰，但不久即发现，精子长期贮存于干冰中后，活率明显降低，其主要原因是因为干冰的最低贮存温度为-79℃，正处于精子冷冻过程中的再结（冰）晶阶段（-15～-80℃），精子可能由于再结晶而造成再次损伤。后来，人们发现了更为理想、有效的冷冻源——液氮。液氮为一种无色、无味、低黏度的液体，其沸点为-195.8℃，具有温度低、不自燃、不助燃、不易爆炸、来源丰富等特点，但极易蒸发，气化后体积可膨大655倍，因此冷冻精子在液氮罐中贮存时，液氮应定期添加，且液氮贮存罐不能密闭，以免发生爆炸；另因液氮温度极低，操作时应佩戴防护手套和护目镜，以免对皮肤和眼睛造成损伤；同时，液氮蒸气比重比空气大，蒸发后容易下沉，应防止液氮蒸气引起的窒息。
依据温度对化学反应速度的关系理论推测，生物体在-196℃低温下，可望保存几个世纪，但Smith和Steinberger在1973年指出，精子贮存大于36个月后，会引起精子存活率的下降，但这样的报道较少。目前，大多数冷冻生物学家认为，精子在冷冻过程的开始阶段，活率有部分丧失，而当置于-196℃液氮中贮存后，其活率不会有进一步的丧失。目前认为，精子长期贮存在-196℃的液氮或-142～-150℃的液氮蒸气中，冷冻复苏未有明显差异，而且，采用液氮蒸气贮存精子可以减少液氮消耗，部分或基本减少标本间的交叉感染。

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安瓿法 早期多采用药用安瓿，使用前高压灭菌，再将与保护剂混合好的精液注入安瓿内

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