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发表于 2013-8-16 16:04:31
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网上当来的Y染色体微缺失小知识 ; e- a b8 `" E6 \
( o$ n0 v8 `% S0 ]
一、背景
' F% s+ j3 ]# z2 c全球不育夫妇占已婚夫妇10%-15% & V: P) K7 m* n& k
其中男性原因占40%-50%
) p m8 R' r5 J3 |* p8 Y遗传因素占男性不育的30%
6 R) C/ |% r+ v! A/ a5 z! D* V7 r2 ?10%-15%的特发性无精症存在Y染色体的微缺失
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/ p" T n# v, y二 Y染色体微缺失相关基因/ N$ t' S( }& X2 t) [
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Y染色体是最短的近端着丝粒染色体,是男性特有的染色体。1976年, Tiepolo和Zuifaidi首先提出Y染色体上有多个基因参与生精过程。多年研究,发现男性特有的Y染色体上面存在一个关键的与生育相关的因子的区域,称为AZF区。目前认为在AZF区上存在四个精子发生亚区(AZFa、AZFb、AZFc、AZFd),各亚区包含的位点在男性生殖细胞 AZFa、AZFb、AZFc、AZFd),各亚区包含的位点在男性生殖细胞发育的不同时期起着不同的作用,位点的缺失可致患者表现为少、弱精症或无精症从而引发不育。一般认为,Y染色体的近端缺失(涉及AZFa和AZFb),表现以唯支持细胞综合症为主的严重生精障碍,Y染色体的远端缺失(涉及AZFd和AZFc),可残留岛状的生精正常区域。对无精症患者中,对检查睾丸过小或睾丸活检仍无精子患者,一般不再行AZF基因检测。总之,开展染色体和AZF检测,可全面评价男性不育遗传缺陷,从而更好的解释发病原因,提供遗传咨询和指导临床诊疗。 & _# P2 V# `3 e& t
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1996年将 AZF区划分为3个区:AZFa、AZFb、AZFc。1999年研究发现在AZFb和AZFc间存在AZFd。研究发现,在Y染色体AZFa、AZFb、AZFc3个区至少发现 15个与精子发生相关的基因,AZFd区尚未发现相关基因。2 l& i3 ]* J1 \* C+ o0 ~% q+ H
5 M1 }) s2 ?4 N8 ]$ zAZFa缺失的病人,主要表现为唯支持细胞综合征伴睾丸体积缩小,无精子生成 ;" t* J o+ K; h+ m1 C+ M9 M
AZFb缺失的病人,主要表现为生精过程阻滞在精母细胞阶段,无精子生成; % |3 N9 A: T; B) b* h
AZFc区缺失病人表现多样化,会出现无精子症和少精子症的不同临床表现。 ( D" b6 Z& M) w1 |
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AZFa缺失患者 33%为严重少精子,67%表现为无精子;6 d K2 G1 M ^* t# } F+ b
AZFb缺失患者 9%轻度少精子, 23%严重少精子, 68%无精子;* n" X; D ]" Y, }* ]4 m% V5 ~
AZFc缺失患者 46%严重少精子,54%无精子;
: \9 X* f" Y+ _% I$ Z+ c3 F2 t9 qAZFa-b缺失患者 50%严重少精子50%无精子;
+ }$ x$ x+ @: @+ u+ m# sAZFa-c缺失患者100%无精子;
: y8 h: ?3 A' ^9 P( D8 AAZFb-c缺失患者 4%严重少精子,96%无精子。# r4 z% f; R) ?& V1 l
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AZFa缺失较为少见 ,占整个AZF缺失4.9%。整个AZFa区域缺失通常表现为SCOS,为绝对的无精子症。若患者为AZFa缺失,不建议做睾丸穿刺寻找精子进行卵细胞胞质内单精子注射,目前只能寻求供精人工授精技术来获得妊娠。! W: n- ~* L( R$ k! Y' o2 @7 y
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AZFb缺失也不多见,占整个AZF缺失15.8%。缺失的典型睾丸组织学特征是精子成熟障碍,主要停滞在初级精母细胞阶段。但也有SCOS的报告,睾丸穿刺不能获得精子,因此 ,临床上也不建议做睾丸穿刺。
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q4 q' E2 T6 u- ~AZFc缺失是临床上最常见的 AZF缺失类型,临床和睾丸组织学表型多种多样。一般说来,AZFc缺失患者尚存精子生成能力。AZFc缺失见于无精子症或严重少精子症患者,罕见情况下,也可以在自然状态下遗传给其男性后代。在无精子症患者中,AZFc缺失者通过睾丸精子穿刺获得精子的机会比其他缺失类型大,同时可以从睾丸穿刺获得精子进行ICSI受孕 ,但这些患者的男性后代都将是AZFc缺失的携带者,建议在进行试管婴儿前,行遗传咨询。* F( ` ^ ]6 W
+ U6 F& P% l- F5 E0 M5 h三 AZF微缺失与其他不育因素/ j2 q: e) v# C- H7 t S
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AZF微缺失与隐睾症AZF微缺失与精索静脉曲张
- m' o" J j/ O% x0 X- @- ZAZF微缺失与双侧输精管缺如AZF微缺失与睾丸支持细胞
. u& B/ h! }2 e3 G; B0 g0 ^AZF微缺失与生殖激素异常AZF微缺失与其他不育因素4 ^, A5 L* n$ d% D
. l' _0 b7 Z4 H3 j# O6 _/ A. ] 四 Y染色体微缺失的检测方法. \7 K1 |2 O) ?9 {) f$ B
5 D+ S% |: D9 `核型分析总体上来说操作繁琐、效率不高,尤其是难以检测出微小的染色体异常或变异。荧光原位杂交(Fluorescence isitu hybridization, FISH)虽然有更高的分辨率,但其检测的范围为20 kb-5 Mb,对于微小的染色体缺失也难以检测,且繁琐的实验操作与高昂的成本也限制了FISH技术在临床中的广泛应用。目前关于Y染色体微缺失的检测方法最常用的是多重聚合酶链反应 (PCR)技术,而检测的位点有很多,但有研究表明SY84、SY152、SY127、SY147/SY254-DAZ和RB SY147/SY254MY1这6个基因标志物能覆盖大部分已发现的微缺失,其他的位点序列灵敏度比较低,当然不同种族间可能会有轻微的差异。/ H" L1 x' i4 b7 n
/ \# @! i( K e) |1 j L( f5 V由于不同实验室采用 PCR方法不同,导致实验结果各异。为提高诊断质量,欧洲男科协会( EAA )和欧洲分子遗传实验质控网( EMQN)在1999年、2004年先后颁先后颁布了第1版和第2版Y染色体微缺失分子诊断指南,规范了检测微缺失时的Y染色体序列标签点(sequencetargetedsites,STS)与所采用的内外对照方法。选择位于Y染色体短臂(Yp)的睾丸决定基因(SRY)和锌指蛋白基因(ZFX/ZFY )为对照。Z既存在于x染色体短臂,也存在于Yp,其与SRY一起构成2个目前推荐使用的参照基因。每个AZF区域至F区域至少设置2个 S T S位点才能正确有效。7 Y1 B- k% D$ g
: w6 ]; {0 _" w6 L. |5 T其推荐的STS为AZFa:sY84,sY86;AZFb:sY127,sY134;AZFc:sY254, sY255。多重PCR实验中的引物应包括:sY14(SRY),zFY,sY84,sY86,sY127,sY134,sY254,sY255。
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" _/ S- l- w0 r8 Z5 }9 P五 染色体微缺失相关基因研究的意义
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" `4 _& e0 _0 s4 u# j, }5 F @% H1 用于原发性无精或少弱精症的遗传咨询。通过遗传病因诊断,找到男性不育的遗传病因,则可避免不必要的药物及手术治疗。
: s. H; h) N0 G) b5 c6 {5 i2 进行辅助生育之前对其进行遗传病因诊断,可尽量避免将不良基因传递给下一代。& S; _1 H A; p: n8 n) k4 g
3 辅助生育精子质量筛选。4 为未来的基因治疗提供理论依据。5 w; a) A2 |( F8 f9 w }
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为临床治疗各种男性不育提供分子或细胞水平的依据。Y染色体微缺失虽然不会影响身体健康和心理健康,但会导致后代出现同样的不育问题。对于不育夫妇,特别是无精子症和严重少精症的不育夫妇,虽然其可以通过 ICSI达到妊娠的目的,并且有正常的胚胎发育和足月妊娠,但在接受ICSI治疗之前有必要进行Y染色体微缺失的检测以及移植前遗传诊断,尽量选择女婴,切断遗传途径。 % t3 y& f4 M# a- }& e
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另外,有研究发现AZFc区域缺失的少精子症患者,其精子数目有进行性下降的趋势,最后发展为无精子症。因此,对AZFc区域缺失的少精子症患者,应及早进行治疗或将其精液进行冷冻保存。 |
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